Hi miteinander,

ich schreibe momentan meine Bachelor Arbeit über den Einfluss von Mykorrhiza Pilzen auf Apfel, allerdings alles unter sterilen Bedingungen in vitro.
Ich bräuchte allerdings noch etwas Hilfe, da meine Betreuer noch nie steril mit Mykorrhizen gearbeitet haben und mir bei ein paar Sachen nicht helfen können (bevor Diskussionen aufkommen: Ich habe mir das Thema selbst ausgesucht).

- Isolieren der Sporen
Ich habe verschiedene Glomus Arten, welche sich in einem Sandgemisch befinden. Um die Sporen verwenden zu können muss ich sie also erst aussieben/nasssieben. Dazu verwende ich ein 250µm Sieb über einem 50µm Sieb. Den Inhalt (Wurzeln, Bodenpartikel etc.) des 250µm Siebs schütte ich weg, den Inhalt des 50µm Siebs wasche ich in einen Behälter. Dort sollten sich dann auch meine Sporen befinden. Wenn ich den Inhalt aber per Mikroskop untersuche, so finde ich fast keine Sporen. Eigentlich nur zufällig stoße ich auf welche. Da macht es auch keinen Unterschied, wenn ich die Sporen nach der bekannten Methode von Bechard et al. (1968) zentrifugiere und dann per Zuckergradient vom Debris trenne. Kann mir von euch vielleicht jemand eine detailierte Anleitung schreiben? Bei diesem Punkt bin ich fast am verzweifeln.

- Sterilisieren der Sporen
Die verschiedenen Rezepte um die Sporen zu sterilisieren kenne ich schon, und muss man wahrscheinlich einfach mal durchprobieren. Jedoch frage ich mich, wie genau ich die Sporen sterilisieren soll.
Die Sporen in die Lösung waschen, danach wieder auf das Sieb zurückwaschen, und kräftig mit autoklaviertem Wasser spülen?
Oder die Sporen einzeln per Pinzette in die Lösung tunken, danach in autoklaviertem Wasser schwenken, und zum vermehren auf meine Wirtspflanze geben?

Ich hoffe, dass es hier Leute gibt, die mit Sporenkultur und Mykorrhizen Erfahrung haben, das würde mir sehr sehr helfen.

Frohe Weihnachten,
Matthias